mTORC2 fosforyluje proteínkinázu Akt na mieste Ser473 v hydrofóbnom motíve po náборе prostredníctvom PIP3, čo vyvolá konformačnú zmenu. V bunkách má mTORC2 vysokú špecifickosť: fosforyluje Akt a PKC, ale nie príbuzné kinázy, ktoré sú substrátmi mTORC1. Vedci vytvorili semisyntetické sondy na zachytenie komplezu mTORC2-Akt a určili jeho štruktúru pomocou cryo-EM. Lokálna sekvencia Akt prispieva len málo k rozpoznaniu substrátu mTORC2, namiesto toho špecifickosť určujú sekundárne a terciárne štrukturálne prvky Akt viažuce sa na mSin1 vzdialené od aktívneho miesta mTOR. Tieto prvky sú zachované u najmenej 18 príbuzných substrátov. mTORC2 priamo a špecificky fosforyluje Ser473 Akt s minimálnym príspevkom lokálnej sekvencie; mutácia Thr443 znižuje fosforyláciu len o 50 %. Akt PH doména nie je nevyhnutná pre C-terminálnu fosforyláciu Akt mTORC2 v roztoku, kde je kcat/KM menej ako 2-násobne odlišný od divokého typu. Štruktúra odhaľuje „substrátový oblúk“, kde kinázová zložka Akt interaguje s mTORC2, vrátane doteraz neviditeľných častí mSin1 CRIM domény a mTOR špirály.[1][2]